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本生闡述:ELISA方法如何檢測(cè)帶抗體的相關(guān)指標(biāo)
更新時(shí)間:2023-07-18瀏覽:980次

  本生闡述:ELISA方法如何檢測(cè)帶抗體的相關(guān)指標(biāo)


  在運(yùn)用ELISA方法測(cè)定抗體方面,通常所用的方法稱為間接法,也是目前常用的方法,其原理:間接法首先用抗原包被于固相載體,這些包被的抗原必須是可溶性的,或者至少是極微小的顆粒,經(jīng)洗滌,加入含有被測(cè)抗體之標(biāo)本,再經(jīng)孵育洗滌后,加入酶標(biāo)記抗抗體,(對(duì)人的標(biāo)本來(lái)說(shuō)即加酶標(biāo)抗人球蛋白IgG、IgM),再經(jīng)孵育洗滌后,加底物顯色,底物降解的量,即為欲測(cè)抗體的量,其結(jié)果可用目測(cè)或用分光光度計(jì)定量測(cè)定。


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  ELISA試劑盒操作步驟:

  1. 將抗原按5μg/ml稀釋于碳酸鹽緩沖液(pH 9.6),100μl /孔,4℃過(guò)夜。

  2. 次日PBS-T清洗4次(快1慢3,間隔5分鐘)。

  3. 加2%BSA封閉室溫1h,200μl /孔。

  4. 陽(yáng)性對(duì)照從10ug/ml,做倍必稀釋,待測(cè)血清從1:50做倍比稀釋,預(yù)試驗(yàn)后確定稀釋倍數(shù)及陽(yáng)性對(duì)照的起始濃度及稀釋數(shù)量(以可以做標(biāo)準(zhǔn)曲線為參數(shù)),室溫1h。

  5. PBS-T清洗4次(快1慢3,間隔5分鐘)。

  6. 加入1:3000(不同公司有不同的推薦稀釋度)PBS-T稀釋的HRP標(biāo)記的山羊抗人IgG,100μl /孔,室溫1h。

  7. PBS-T清洗4次(快1慢3,間隔5分鐘)。

  8. 顯色,100μl /孔,顏色變深后中止顯色,2M硫酸在BIO-RAD酶標(biāo)儀上讀數(shù),可用ABTS,OPD,TMB等。

  ELISA試劑盒 本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命,追求企業(yè)競(jìng)爭(zhēng)力的不斷提升。公司在經(jīng)營(yíng)中始終秉承:遵紀(jì)守法,嚴(yán)于律己,寬仁以待,敢于承擔(dān)的企業(yè)精神作為標(biāo)準(zhǔn),以過(guò)硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務(wù)來(lái)維護(hù)和拓展市場(chǎng),較大限度的滿足客戶的需求。與客戶的共贏,是我們的發(fā)展目標(biāo)。本生!您信任的合作伙伴。我們?cè)概c您真誠(chéng)合作,共創(chuàng)美好的未來(lái)。

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