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以下是關(guān)于人胃促生長(zhǎng)素(Ghrelin)ELISA試劑盒的實(shí)驗(yàn)使用說(shuō)明綜合指南：
一、實(shí)驗(yàn)原理
雙抗體夾心法?：采用包被抗體的微孔板捕獲樣本中的Ghrelin，通過(guò)HRP標(biāo)記檢測(cè)抗體形成復(fù)合物，TMB顯色后測(cè)定OD值。
競(jìng)爭(zhēng)法?(部分試劑盒)：樣本中Ghrelin與標(biāo)記抗原競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合抗體，OD值與濃度呈負(fù)相關(guān)。
二、樣本處理
類(lèi)型?：血清、血漿(EDTA/肝素抗凝)、細(xì)胞上清液、組織勻漿。
采集要求?：
血清/血漿：4℃下3000轉(zhuǎn)離心10-30分鐘，避免溶血。
組織樣本：需用生理鹽水勻漿后離心取上清。
保存?：2-8℃可存48小時(shí)，長(zhǎng)期保存需-20℃分裝，避免反復(fù)凍融。
三、試劑盒組成
包被微孔板、標(biāo)準(zhǔn)品(需用蒸餾水稀釋)、HRP標(biāo)記抗體、TMB底物、終止液、洗滌緩沖液(20倍濃縮需稀釋)。
部分試劑盒含生物素化抗體及鏈霉親和素-HRP。
四、操作步驟
平衡試劑?：所有組分需室溫平衡15-30分鐘。
加樣?：
標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋(如10-1280 ng/ml)。
樣本按1:100稀釋(如10μl樣本+1ml稀釋液)。
孵育?：37℃溫育1小時(shí)，底洗滌3-5次。
顯色?：加入TMB底物，避光反應(yīng)15分鐘，硫酸終止。
檢測(cè)?：酶標(biāo)儀450nm讀取OD值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算濃度。
五、注意事項(xiàng)
質(zhì)量控制?：板內(nèi)/板間變異系數(shù)應(yīng)<10%，回收率需達(dá)81%以上。
干擾避免?：
避免孔內(nèi)液體殘留影響洗滌效果。
底物變藍(lán)或過(guò)期不可使用。
保存條件?：未使用試劑2-8℃保存，避免強(qiáng)光照射。
六、典型數(shù)據(jù)
檢測(cè)范圍?：0.78-50 pg/mL(競(jìng)爭(zhēng)法)或更高濃度(夾心法)。
靈敏度?：可達(dá)0.32 pg/mL。
不同品牌試劑盒可能存在細(xì)節(jié)差異，建議以具體產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn)。
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